بیان، تخلیص و بررسی ایمونوژنیسیتی پروتئین نوترکیب بخش کربوکسیل زیر واحد اتصال دهنده نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B (BoNT/B-HcC)

بوتولیسم، سندروم ناشی از مسمومیت غذایی، به دنبال استفاده از غذای آلوده به سموم عصبی بوتولینوم به وجود می آید که بسیار خطرناک و کشنده هست. بیماری بوتولیسم به علت تاثیر سم باکتری بر پایانه های اعصاب حرکتی ایجاد می شود. نوروتوکسین های بوتولینوم جزء قوی ترین سموم شناخته شده می باشند. هدف از این تحقیق بیان، تخلیص و بررسی میزان ایمونوژنیسیتی پروتیین نوترکیب BoNT/B-HcC به عنوان یک کاندید ایمونوژن در حیوان آزمایشگاهی موش بود.

انتهای کربوکسیل ناحیه اتصال دهنده نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B به عنوان آنتی ژن مورد ارزیابی های بیوانفورماتیک قرارگرفت. پلاسمید pET17b-BoNT/B-HcC  به روش شوک دمایی به باکتریBL21(DE3) E . coli منتقل شد. پروتیین نوترکیب به روش کروماتوگرافی تمایلی، تخلیص و با تکنیک SDS-PAGE بررسی گردید. پس از تایید پروتیین نوترکیب با روش وسترن بلات، ایمنی زایی پروتیین در موش آزمایشگاهی انجام شد. تیتر آنتی بادی با استفاده از الایزای غیرمستقیم ارزیابی و نتایج با آزمون آماری t ارزیابی و مقایسه گردید.

ژن بهینه سازی شده شاخص سازگاری کدون 0/99 را دارا شد. درصد کدون های با شیوع بالا در ژن به 78 درصد بهبود یافت. توالی ساز ژنی 1119 جفت باز با برش آنزیمی تایید و پروتیین نوترکیب با وزن 43/8 کیلودالتون در میزبان پروکاریوتی بیان گردید. میزان پروتیین خالص شده برای هر لیتر از محیط کشت 23 میلی گرم  بود. ایمن سازی موش ها پاسخ آنتی بادی سرمی را القا کرد و آنالیز های آماری نشان داد که میزان تیتر آنتی بادی در مقایسه با نمونه کنترل تفاوت معنی داری دارد.

آنتی ژن نوترکیب طراحی شده آنتی ژنیسیته بالایی نشان داد و می تواند به عنوان یک ایمونوژن علیه نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B در تحقیقات بعدی مورد بررسی قرار گیرد.