تهیه و بررسی خواص کونژوگه اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا با نانوذره طلا

سودوموناس آیروژینوزا یک پاتوژن فرصت طلب و مهمترین عامل عفونت های بیمارستانی است که به کمک فاکتورهای ویرولانس مختلف ازجمله اگزوتوکسین A باعث سپتی سمی و مرگ و میر در بیماران می شود. در طی این مطالعه اگزوتوکسین A سودوموناس آیروژینوزا به عنوان یک فاکتور توکسیک، باهدف به دست آوردن یک ترکیب جدید کاندید واکسن و نوترکیب تهیه شده و با نانوذرات طلا کونژوگه و اثرات ایمنی زایی آن در مدل حیوانی مورد ارزیابی قرار گرفت.

اگزوتوکسین A ذاتی (native) ابتدا از محیط کشت سودوموناس آیروژینوزا با رسوب انتخابی و دیالیز استخراج و خالص سازی شد. جهت تولید اگزوتوکسین A نوترکیب، DNA ژنومی این باکتری به وسیله وکتور مناسب در اشرشیا کلی کلون شد. نانوذرات طلا با استفاده از روش ترکویچ (Turkevich) تهیه و با نیروی الکترواستاتیکی به اگزوتوکسین A آماده شده کونژوگه شدند. در نهایت اندازه و کونژوگاسیون به ترتیب با استفاده از میکروسکوپ الکترونی و طیف سنجی تبدیل فوریه فروسرخ (FTIR) تایید شد. در نهایت داده های کمی به صورت میانگین سه بار تکرار و انحراف استاندارد و همچنین داده های کیفی به صورت فراوانی (درصد) ارایه شد.

نتایج به دست آمده نشان داد که اگزوتوکسین A سودوموناس آیروژینوزا از محیط کشت با خلوص نسبی قابل استخراج است. همچنین بیان پروتیین نوترکیب به وسیله اشرشیا کلی و استفاده از وکتور PET22b اشرشیا کلی منجر به تولید اگزوتوکسین A نوترکیب در غلظت بالا شد. سپس نانوذرات طلا با هر دو اگزوتوکسین A ذاتی و نوترکیب کونژوگه شد. نتایج به دست آمده نشان داد که نانوذره طلا با اگزوتوکسین A به خوبی کونژوگه می شود.

به طور کلی مطالعه حاضر نشان داد که می توان اگزوتوکسین A نوترکیب و ذاتی را با غلظت بالا در آزمایشگاه تولید و با نانوذره طلا کونژوگه کرد.