بیان لیگاند القاء کننده آپوپتوز وابسته به فاکتور نکروز دهنده تومور کنژوگه با ناحیه scFV آنتی بادی ضد CD20 با استفاده از ریز مولکول های تغییر دهنده وابسته به یوبیکوئیتین

درمان های مرسوم موفقیت کمی در درمان سرطان نشان داده اند. استفاده از قطعات آنتی بادی کنژوگه شده با پروتیین های خاص و هدفمند کردن آن یک روش نوین در تولید داروهای ضد سرطان است. علیرغم مزایای میزبان های پروکاریوتی، بیان پروتیین به شکل اجسام انکلوزیون بادی (سیتوپلاسمی) چالش برانگیز بوده و منجر به سختی های بعدی می شود. تولید پروتیین به صورت محلول تا حد زیادی به حل این مشکل کمک می کند. هدف اصلی این مطالعه شبیه سازی و بیان لیگاند القاکننده آپوپتوز مرتبط با فاکتور نکروز دهنده تومور (TRAIL) کونژوگه با قطعه متغیر تک زنجیر آنتی بادی (scFV) ضد CD20 آنتی بادی ضد CD20 به عنوان یک پروتیین محلول با استفاده از تعدیل کننده کوچک وابسته به یوبیکویتین بود. سیستم پروتیین فیوژن اصلاح کننده (SUMO) در E. Coli  به عنوان روشی جدید برای تولید بهینه داروهای ضد سرطان است.

پرایمرهای مناسب برای یک توالی DNA از قبل طراحی شده که پروتیین فیوژن را کد می کند برای تکثیر قطعه استفاده شد و در پلاسمید pSUMO در ناحیه پایین دست توالی برچسب ژنیSUMO ساب کلون گردید. پس از تایید با روش های استاندارد، پلاسمید نوترکیب به سویه E. Coli strain BL21 (DE3) منتقل شد. بیان توسط ایزوپروپیل بتا-دی-1-تیوگالاکتوپیرانوزید القا شد. پروتیین های بیان شده توسط SDS-PAGE ارزیابی و سپس با کروماتوگرافی میل ترکیبی جداسازی شدند. برای تایید بیان پروتیین از وسترن بلات استفاده شد.

نتایج نشان داد که DNA پروتیین نوترکیب فیوژن به درستی ساب کلون شده و آنالیزهای مربوطه نشان داد که فرآیند بیان موفقیت آمیز بوده است. پروتیین فیوژن نوترکیب با تجزیه و تحلیل مناسب تایید شد.

تولید پروتیین های نوترکیب به صورت محلول در میزبان پروکاریوتی E. coli می تواند هزینه های مصروف در فرآیندهای پایین دستی را کاهش دهد و با توجه به نتایج مناسب این تحقیق در تولید پروتیین فیوژن AntiCD20 scFV-TRAIL به صورت محلول می توان از روش استفاده شده در این تحقیق به منظور تولید محلول و عملکردی این گونه پروتیین های نوترکیب بهره برد.