PCR-RFLP پلاسمیدهای کوکسیلا بورنتی جدا شده از نمونه های شیر خام در ایران

  با توجه به حضور توالی های ژنی منحصر به فرد در پلاسمید اختصاصی QpH1 مختص کوکسیلا بورنتی، روش های متعددی برای تمایز جدایه های کوکسیلا بورنتی بر اساس این پلاسمید جهت تفریق فرم حاد از فرم مزمن بیماری تب کیو در انسان و حیوانات استفاده شده است. بنابراین هدف اصلی این مطالعه بررسی تابلوی قطعات اسید نوکلئیک ناشی از برش آنزیمی در پلاسمید QpH1 جداشده از شیر گاو و گاومیش با روش واکنش زنجیره ای پلیمراز آشیانه ای می باشد.

  تعداد 86 جدایه کوکسیلا بورنتی حاوی ژن پلاسمیدی QpH1 که با روش Nested-PCR طی سال 2018 تایید شده بودند به منظور تعیین تابلوی RFLP پلاسمید QpH1 مورد استفاده قرار گرفت. پلاسمید ها ابتدا با کیت استخراج شدند و سپس تحت تاثیر آنزیم محدود کننده Hph1 قرار گرفتند. تعداد 4 نمونه اسید نوکلئیک جهت تعیین توالی با پرایمر ژن IS1111 به شرکت پیشگام ارسال گردید.

  نتایج آزمایش PCR-RFLP نشان داد که همه نمونه های پلاسمیدی یک الگوی مشابه دو قطعه ای را تحت تاثیر آنزیم Hph1 نشان دادند. همچنین نتایج تعیین توالی اسید نوکلئیک تمامی 4 نمونه ارسالی نشان داد که کوکسیلا بورنتی (Nine Mile RSA493 strain) می باشند.

  نتایج نشان داد که هیچ تفاوتی در الگوهای RFLP بر روی پلاسمید QpH1 کوکسیلا بورنتی جداشده از شیر گاو و گاومیش وجود ندارد. بنابراین تمام جدایه ها از نظر ژنتیکی یکسان هستند و عفونت در حیوانات می تواند از یک سویه کوکسیلا بورنتی (سویه Nine Mile RSA493) منشاء گرفته باشند.