کلون کردن ژن آنتی ژن ایمنی بخش Bacillus anthracis در Bacillus subtilis

آنتی ژن ایمنی بخش(PA) (Protective antigen) Bacillus anthracis به عنوان واکسن سیاه زخم مورد استفاده قرار می گیرد. کلون و بیان ژن PA در سویه های مختلف گزارش شده است که بیش ترین بیان، درB. subtilis تا μg/ml 160 بوده است. هدف ازاین تحقیق کلون کردن ژن PA در ناقل بیان کننده pWB980 و انتقال آن به B. subtilis سویه WB600 می باشد.
در این مطالعه پلاسمید pXO1 از B. anthracis سویه Stern با روش قلیا جدا و ترادف بازی kb 4/2 ژن با استفاده از PCR تکثیر گردید. قطعه تکثیر یافته به طور مستقیم بر روی ناقل pTZ57R کلون و با استفاده از روش CaCl2 به E.coli سویه DH5α انتقال یافت. سپس ژن با آنزیم های SalI و KpnIاز روی T-Vector جدا گردید. واکنش اتصال بین قطعه ژن خالص شده PA و ناقل pWB980 گذاشته شد و سپس با روش Electroporation در V 1000 به B. subtilis منتقل شد.
در این تحقیق توانستیم ژن PA را به وسیله PCR از B. anthracis سویه Stern جدا و ابتدا در پلاسمید pTZ57R کلون کرده و وجود ژن با تجزیه و تحلیل آنزیمی، واکنش PCR و تعیین ترادف بازی (Sequencing) تایید گردید. سپس ژن بر روی ناقل بیان کننده pWB980 و در B. subtilis کلون و وجود ژن در دو کلنی مقاوم به کانامایسین AMN1 و AMN3 با استفاده از تجزیه و تحلیل آنزیمی و واکنش PCR تایید گردید.
در این تحقیق با تغییر در روش های مورد استفاده و استفاده از ناقل بیان کننده pWB980 توانستیم ژن PA را درB. subtilis کلون کنیم. این ژن برای اولین بار در ایران جدا و کلون شده است؛ هم چنین این تحقیق اولین کار کلون کردن ژن در میزبان B. subtilis در ایران می باشد.