بررسی تخم تریکوسترنژیلوس های جدا شده از گوسفندان منطقه اصفهان به روش PCR-RFLP

تریکوسترنژیلوس یکی از انگلهای مشترک انسان و دام است که آلودگی به آن معضلی اقتصادی و بهداشتی قلمداد میگردد. لذا در این مطالعه، تخم کرم گونه های مختلف تریکوستنرنژیلوس جدا شده از مدفوع گوسفندان منطقه اصفهان به روش PCR-RFLP و با استفاده از قطعه rDNA-ITS2 مورد بررسی قرار گرفت.
مطالعه به روش توصیفی بر روی محتویات دستگاه گوارش70 راس گوسفند کشتار شده در کشتارگاه های شهر اصفهان و خوراسگان انجام پذیرفت. تخمهای انگل با روش مستقیم و فلوتاسیون جدا و تخم کرم گونه های تریکوسترنژیلوس براساس شاخصهای ریخت شناسی، شناسایی و جمع آوری شدند، سپس با روش PCR-RFLP مورد بررسی قرار گرفتند. در مطالعه ژنوتیپی DNA ژنومی تخم کرمها، استخراج شد و واکنش PCR با پرایمر اختصاصی قطعه rDNA-ITS2 انجام گرفت. محصول PCR هر ایزوله توسط آنزیمهای محدودکننده RsaI - HinfI - DraI هضم و بر روی ژل آگارزالکتروفورز شد و از آنها عکس تهیه گردید.
با توجه به تشابه مرفولوژی تخم گونه های مختلف تریکوسترنژیلوس در زیر میکرسکوپ تشخیص افتراقی آنها امکان پذیر نمی باشد، لذا تشخیص با استفاده از الگوی ژنوتیپی تخم کرمها به روش PCR-RFLP انجام پذیرفت. اندازه محصول PCRوDNA استخراج شده از تخم کرمها یکسان و حدود 330 نوکلئوتید بود ولی الگوی PCR-RFLPگونه ها با یکدیگر متفاوت بود. پس از هضم محصول PCR آنها با آنزیم RsaI دو قطعه حدود 138 و 190 نوکلئوتیدی مشاهده شد. محصول PCR Trichostrungylus به دست آمده، با آنزیم DraI هضم نشد، اما سه گونه T.vitrinus T.aziei و T.colubrifornois هضم شدند و دو قطعه حدود 110 و 215 نوکلئوتیدی در T.axei و T.colubriformis رویت گردید که الگویی مشابه همدیگر داشتند. اما T.vitrinus واجد دو قطعه حدود 145 و 185 نوکلئوتیدی بود. از بین چهار گونه فوق تنها محصول PCR تریکوسترنژیلوس Colubriformis با آنزیم HinfI هضم شد و دو قطعه حدود 90 و 238 نوکلئوتیدی روی ژل اگارز مشاهده گردید.
با توجه به تنوع گونه های انگلی و عدم تشخیص افتراقی آنها به روش میکروسکوپی پیشنهاد می شود با استفاده از پرایمرها و آنزیمهای محدودکننده مختلف، از روش PCR در تشخیص گونه های انگلی مورد نظر استفاده شود.