شناسایی گونه های آسپرژیلوس مهم بیماری زا با استفاده از پلی مورفیسم اشکال کانفورماسیونی تک رشته های DNA ژن کد کننده rRNA

تست مولکولی SSCP [1] روشی بر پایه PCR است که به عنوان یکی از شیوه های سریع شناسایی قارچ ها مورد علاقه قرار گرفته است. این فن در گذشته برای اهدافی غیر از شناسایی میکروارگانیزم ها، از جمله در آنالیز موتاسیون ها مورد استفاده قرار گرفته است، بعدها در شناسایی و تفکیک بین گونه ای برخی اورگانیزم ها کاربرد پیدا کرد.
با توجه به قابلیت روش فوق در تعیین اختلافات بین ترادف های ژنی از طریق پلی مورفیسم تک رشته های DNA بدست آمده از محصولات PCR، در این مطالعه سعی شده است که امکان استفاده از این روش که بی نیاز از هضم با آنزیم های محدودساز می باشد در ایجاد افتراق بین گونه ها بررسی شود.
205 ایزوله آسپرژیلوسی در این مطالعه از نمونه های بالینی و محیطی چند بیمارستان آموزشی کشور و نمونه های بالینی بیماران مراجعه کننده به مرکز قارچ شناسی بدست آمده بودند، مورد بررسی قرار گرفتند. این تعداد با توجه به شیوع یک درصدی عفونت های آسپرژیلوسی در میان عفونت های قارچی بیمارستانی انتخاب شدند. تمامی جدایه های آسپرژیلوسی، در محیط های کشت افتراقی آسپرژیلوس ها شامل: CYA، CYA20S، MEA و CZA کشت داده شده، با استفاده ازخصوصیات کلنی و جلوه های میکروسکوپی شناسایی شدند. در روش مولکولی استخراج DNA به روش دستی گلاس بید و فنل - کلروفرم، آمپلیفیکاسیون قطعه ITS2 و دناتوراسیون DNA برای تولید تک رشته انجام گرفت، سپس با استفاده از [2] G- PAGE و عکس برداری از باندها الگوهای تفکیکی مقایسه شدند.
در طول یک مطالعه 18 ماهه، 205 ایزوله آسپرژیلوسی شامل یازده گونه بدست آمد، منابع جداسازی گونه ها، نمونه های محیطی و بالینی بیمارستانی بودند. ایزوله های آسپرژیلوسی 25 درصد از منابع بالینی و 75 درصد از نمونه های محیطی بیمارستان ها بدست آمدند. در بررسی SSCP که نتیجه آن افتراق بین گونه های آسپرژیلوس بود. آسپرژیلوس نیدولانس، آسپرژیلوس فیشری، آسپرژیلوس کوادریسینکتا، (آسپرژیلوس فومیگاتوس و آسپرژیلوس نایجر) در یک گروه، (آسپرژیلوس فلاوس، آسپرژیلوس ترئوس، آسپرژیلوس اوکراسئوس) در گروه دیگر از هم قابل تفکیک هستند.
SSCP به عنوان یک روش سریع، کم هزینه و آسان می تواند برای شناسایی مهم ترین گونه های آسپرژیلوس بیماریزای انسان مورد استفاده قرار گیرد، هر چند که به دلیل ویژگی پایین روش احتمالا در کاربرد وسیع آن در آزمایشگاه های روتین تردید وجود دارد.