جدا سازی پپتیدهای غنی از متیونین با استفاده از تکنولوژی نمایش فاژی

استفاده از تکنولوژی نمایش فاژی (مجموعه پپتیدهایی که روی فاژ کلون شده اند) برای مطالعه تعیین اپی توپها، ممانعت کننده های آنزیم، لیگاندهای رسپتورها و غیره رو به افزایش است. برای انتخاب پپتیدها دو آزمایش انجام شد. نخست، درمطالعه بر روی گوسفند، آنتی بادی های ایمنی زای حاصل از 11 گوسفند که علیه بیماری میازیس (Blowfly strike) با استفاده از لارو انگل Lucilia cuprina واکسینه شده بودند بعنوان انتخاب کننده (selector) مثبت و آنتی بادی های غیر ایمن و نیز آنتی بادی قبل از واکسیناسیون بعنوان انتخاب کننده منفی به روش غربالگری (Biopanning) با فاژها مورد استفاده قرارگرفتند. این آنتی بادی ها به منظور خالص سازی IgG، از ستون حاوی پروتئین G عبور داده شدند. چهار مرحله انتخاب مثبت و منفی متعاقب هم انجام شد. همچنین IgG از سرم 39 بیمار مبتلا به مولتیپل اسکلروزیس (MS)،19 بیمار مبتلا به شیزوفرنی و 12 بیمار که از بیماری های غیر سیستم عصبی (کنترل) فوت کرده بودند، بوسیله ستون حاوی پروتئین G خالص سازی شد. غربالگری در چهار مرحله بعنوان انتخاب (selection) مثبت با هر کدام از IgG افراد مبتلا بهMS و شیزوفرنی انجام شد. در مورد هر کدام از این ایمونوگلوبولین ها، دو مرحله انتخاب منفی با IgG دیگر (در مورد MS انتخاب منفی با شیزوفرنی و بر عکس) و نیز دو مرحله انتخاب منفی با IgG کنترل انجام شد. پس از انجام چهار مرحله انتخاب مثبت و منفی، فاژها تکثیر یافتند. سپس آنها روی محیط کشت شده و پس از رشد، چند کلون از فاژها برای تعیین ردیف نوکلئوتید (nucleotide sequence) آنها برداشت شد. 44 پپتید از بیماران مختلف با استفاده از برنامه PILEUP انتخاب شدند که تعداد 15 پپتید از پپتیدهای فوق دارای 4 یا 5 متیونین بودند.