بررسی میزان بیان ژن های غضروفی در کشت تک لایه و سه بعدی کندروسیت های مفصلی موش صحرایی با روش Real time PCR

مقایسه میزان بیان برخی ژن های اختصاصی و غیر اختصاصی بافت غضروفی در کشت سه بعدی (داخل آلژنیت) و تک لایه کندروسیت های مفصلی غضروف مفصلی از زانوی ده سر موش صحرایی نرجدا شد و در محلول آنزیمی متشکل از کلاژناز تیپI 2/0 درصد و پروناز1/0 درصد قرار داده شد. کندروسیت های رها شده، در فلاسک های 25 سانتی متری کشت و با انجام چندین پاساژ تکثیر شد. سپس106×5 سلول پاساژ 5، با یک میلی لیتر ژل آلژینت 5/1% مخلوط شد و سوسپانسیون سلولی حاصل به صورت دانه های ریز، به مدت 2 ماه کشت شد. در زمان های مختلف کشت، میزان بیان ژن های Sox 9، کلاژن II، I و آگریکان با روش Real time PCR اندازه گیری شد و با کشت کندروسیت ها در سطح ظروف پلاستیکی مقایسه شد. همچنین مورفولوژی سلول ها در دو حالت کشت با میکروسکوپ نوری معمولی یا معکوس مشاهده شد.
سلول ها در کشت تک لایه با مورفولوژی دوکی شکل مشاهده شدند، در حالی که در کشت سه بعدی مورفولوژی گرد و کروی داشتند. بررسی های مولکولی نشان داد که در کشت دو بعدی (تک لایه) بیان ژن رونویسی sox9 و همچنین ژن های کلاژن II و اگریکان کاهش و بیان کلاژن I افزایش یافته است. در حالی که در کشت آلژینت، ژن sox9 به مقدار زیادی بیان شد که با افزایش در بیان ژن کلاژن II و اگریکان همراه بود. از طرفی بیان کلاژن I کاهش چشمگیری داشت. تفاوت بیان ژنی در دو حالت کشت، از لحاظ آماری معنی دار بود (P