همسانه سازی و تعیین خصوصیات ژن مسئول بیوسنتز اسید اروسیک در گیاه کلزا

جنس براسیکا بر حسب میزان اسید اروسیک، به دو گروه عمده تقسیم می شود: گروه اول دارای مقادیر زیاد اسید اروسیک و دسته دوم دارای مقادیر کم اسید اروسیک هستند. روغنهای دارای مقادیر بالای اسید اروسیک برای مصارف مختلف صنعتی و واریته هایی با قدرت تولید مقادیر کم اسید اروسیک برای مصارف خوراکی مطلوب می باشند. در این تحقیق جداسازی ژن و راه انداز اختصاصی مسئول بیوسنتز آنزیم -ketoacyl-CoA synthase (KCS) β و تاثیر آن بر میزان اسید اروسیک در بذر گیاه کلزا مورد بررسی قرار گرفت. بدین منظور دو جفت آغازگر طراحی و با استفاده از تکنیک PCR از منبع DNA ژنومی اقدام به جداسازی ژن و راه انداز گردید. ژن و راه انداز ابتدا در ناقل عمومی +pSK همسانه سازی و پس از تعیین توالی و تایید نهایی، در پلاسمید بیانی گیاهی (pBI121) همسانه سازی شدند. پلاسمید حاوی ساختار دست ورزی شده به واسطه Agrobacterium به گیاه کلزا منتقل گردید. به منظور اثبات انتقال ژن به گیاه آنالیزهای مولکولی PCR، Dot blot و Southern blot روی گیاهان انجام شد. در نهایت عملکرد ژن و تاثیر سازه منتقل شده از طریق ارزیابی میزان تغییرات اسید اروسیک روغن گیاهان تراریخت در مقایسه با گیاه شاهد توسط روش کروماتوگرافی گازی (GC) مشخص گردید. نتایج نشان داد که در 4 گیاه تراریخت میزان اسید اروسیک افزایش چشمگیر نشان داد. بیشترین بیان سازه منتقل شده در نمونه شماره 4 مشاهده گردید که در آن میزان اسید چربC22:1 به حدود 13 درصد نسبت به 1/1 درصد در گیاه شاهد رسید.