تولید پروتئین نوترکیب MPT-64 از سویه حاد مایکوباکتریوم بویس

سل (TB) یک بیماری عفونی مشترک بین انسان و حیوان است که توسط یک باکتری میله ای شکل و اسید فست به نام مایکوباکتریوم بویس ایجاد می شود. شناسایی سریع و دقیق، یک نکته مهم در تشخیص بیماری سل است. سویه های حاد کمپلکس مایکوباکتریوم توبرکلوزیس (MTBC)، 16 ناحیه آنتی ژنی متفاوت (RD) در ژنوم شان دارند که بعضی از آنتی ژن های مهم را کد می کنند. پروتئین اصلی 64 مایکوباکتریوم بویس (MPT-64) یکی از آنتی ژن های تحریک کننده سیستم ایمنی بوده که توسط ناحیه RD-2 کد می شود. هدف از مطالعه حاضر کلون کردن، بیان و خالص سازی MPT-64 به عنوان یک آنتی ژن پروتئینی از سویه مایکوباکتریوم بویس بیماری زا در یک سیستم پروکاریوتی برای استفاده در مطالعات تشخیصی آینده بود. در این مطالعه تجربی، قسمتی از ژن mpt-64 با اندازه 687 جفت باز از مایکوباکتریوم بویس، با روش واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) تکثیر شد. محصول واکنش زنجیره ای پلیمراز با آنزیم های محدود کننده BamHI و HindIII هضم و داخل پلاسمید pQE-30 کلون شد. پروتئین نوترکیب در اشریشیای کولای M15 با القای ایزوپروپیل-بتا-دی-تیوگالاکتوپیرانوزید (IPTG) بیان شد. پروتئین های بیان شده، با SDS-PAGE بررسی و خالص سازی با ستون نیتریلوتریاستیک اسید (Ni-NTA) انجام شد. در پایان، خواص بیولوژیک پروتئین با روش وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی اختصاصی تایید شد. داده ها نشان داد که ژن mpt-64 به صورت موفقیت آمیز (به عنوان قطعه 687 جفت بازی) در حامل بیانی کلون شد. پروتئین نوترکیب MPT-64 به طور مطلوب بیان شده بود و به عنوان یک پروتئین 24 کیلو دالتونی خالص سازی شد. نتایج این مطالعه نشان داد که پروتئین نوترکیب MPT-64 (24 کیلو دالتونی) به طور موفقیت آمیز، در یک سیستم پروکاریوتی بیان و خالص سازی شد. بنابراین، این پروتئین می تواند برای تشخیص افتراقی مایکوباکتریوم های بیماری زا و غیر بیماری زا، در موارد مشکوک سل گاوی استفاده شود.