اعتبارسنجی MS-PCR و تعیین پیش جهش ژن FMR1 در نارسایی زودرس تخمدان

زمینه: 

نارسایی زودرس تخمدان وابسته به ایکس شکننده از نظر بالینی به عنوان نوعی از نارسایی اولیه تخمدان با چرخه های قاعدگی نامنظم، افزایش سطح هورمون محرک فولیکول، یایسگی زودرس و ناباروری تعریف شده است. از نظر ژنتیکی عامل آن پیش جهش تکرار CGG ناحیه 5'-ترجمه نشده ژن FMR1 می‌باشد. هدف این مطالعه استاندارد سازی روش‌های مولکولی و مقایسه تعداد تکرار CGG ژن FMR1 در بیماران نارسایی زودرس تخمدان بود.

روش‌ کار: 

پس از اخذ رضایت و خونگیری، DNA ژنومی استخراج و به دو روش دستی و کیت با سدیم بی سولفیت تیمار شد. با استفاده از دو جفت پرایمر اختصاصی، DNA متیله شده و DNA غیرمتیله با واکنش زنجیره ای پلیمراز اختصاصی متیلاسیون تکثیر و محصولات به ترتیب به ترتیب n3+ 108 و n3+ 168 جفت باز بر روی ژل آگارز آشکار شد. پس از ارزیابی های بالینی 20 بیمار مبتلا به فرم تک گیر و 2 خانواده با حداقل دو فرد مبتلا مورد مطالعه قرار گرفتند.

یافته‌ها: 

متوسط سطح سرمی هورمون محرک فولیکول در موارد تک گیر UI/L 73/44± 45/85 و در موارد خانوادگی UI/L 61/33± 72/75 بود. بررسی های سونوگرافیک در موارد تک گیر و موارد خانوادگی به ترتیب 80 درصد و 75 درصد تخمدان های آتروفیک را گزارش کرد. صحت تیمار بیسولیفیت DNA در هر دو روش دستی و کیت تایید شد، و تفاوتی بین دو روش مشاهده نشد. نتایج بررسی تعداد تکرارها بر روی ژل آگارز نشان داد دو بیمار در بین موارد تک گیر (10 درصد) ناقل الل اینترمدییت FMR1 بودند. هیچ موردی از پیش جهش و یا جهش کامل در موارد تک گیر یا خانوادگی مشاهده نشد، و تعداد تکرارها در آن ها بین 15 تا 35 تخمین زده شد.

نتیجه‌گیری: 

به دلیل نقش ژن FMR1 در عملکرد تخمدان، بررسی آن از اهمیت برخوردار است استانداردسازی یک روش تشخیص مولکولی سریع و مقرون به صرفه از اولویت ها در این زمینه می باشد.

پیامدهای عملی:

 تعیین تکرار CGG ناحیه 5'-ترجمه نشده ژن FMR1 و شناسایی پیش جهش هایی که ممکن است گسترش یافته و منجر به سندرم ایکس شکننده شوند در میان زنان جوان امکان مشاوره ژنتیکی لازم برای برنامه ریزی زندگی باروری را فراهم می کند.