تولید و خالص سازی آنتی بادی پلی کلونال علیه مولکول CD166 خرگوش

CD166 یک مولکول چسبنده لکوسیت فعال شده (ALCAM) است و به عنوان مولکول چسبنده سلول به سلول عمل می کند. CD166 نقش مهمی در زنده ماندن، رشد و تهاجم سلول های سرطانی دارد. این پژوهش به منظور تهیه آنتی بادی پلی کلونال علیه آنتی ژن CD166 طراحی گردید.

پپتید انتخاب شده از مولکول CD166 سنتز شده و پس از کانژوگه شدن با پروتیین KLH، در امولسیونی با ادجونت کامل فروند، به دو خرگوش ماده نیوزیلندی به صورت زیر جلدی و در چند نوبت تزریق شد. سپس آنتی بادی های موجود در سرم خرگوش با روش FPLC تخلیص شده و مقدار آن با روش الیزای غیرمستقیم تعیین گردید. با روش خالص سازی ژل سیانوژن-بروماید، آنتی بادی های اختصاصی بر ضد پپتید CD166 متصل به KLH جداشده، و غلظت آنتی بادی تولیدی علیه پپتید یا پپتید -KLH با روش الایزا تعیین گردید.

بعد از تزریق مکرر پپتید CD166 متصل به KLH، آنتی بادی بر ضد پپتید CD166 تولیدشده ولی از تیتر پایینی برخوردار بود. بخش عمده ای از آنتی بادی تولیدی علیه قسمت اتصال پپتید-KLH ساخته شده بود. همچنین تمایل آنتی بادی های تولیدی برای اتصال به پپتید-KLH در مقایسه با پپتید به تنهایی بیشتر بود.

آنتی بادی های تولیدی، بیشتر بر ضد شاخص آنتی ژنی پپتید-KLH بود. سنتتیک و کوچک بودن پپتید تزریق شده می تواند دلیلی برای کم بودن تیتر و میل اتصال آنتی بادی به آن باشد.