بهینه سازی تولید پپتیبادی رومیپلاستیم نوترکیب در اشرشیا کلی

رومیپلاستیم یک پروتیین پیوندی می باشد که در بدن عملکردی مشابه با پروتیین ترومبوپویتین دارد و بدین وسیله باعث تحریک مغز استخوان برای ساخت بیش تر پلاکت می شود. ترومبوپویتین هورمونی است که تولید پلاکت را کنترل می کند. داروی رومیپلاستیم در درمان ترومبوسیتوپنی در بیماران دارای ایمیون ترومبوسیتوپنی مزمن (ITP) زمانی که سایر داروها مانند گورتیکواستروییدها و ایمنوگلوبولین ها و یا عمل جراحی برداشتن طحال جواب نداده باشد، استفاده می شود. هدف از این مطالعه، کلونینگ و بهینه سازی شرایط بیان ژن و خالص سازی پپتیبادی رومیپلاستیم نوترکیب در باکتری اشرشیا کلی بود.

در این مطالعه کاربردی، متغیرهای مستقل مورد استفاده شامل میزان OD (4/0، 8/0 و 2/1) در طول موج 600 نانومتر، غلظت IPTG (5/0، 1 و 5/1 میلی مولار) و نوع محیط کشت (LB, TB, M9) بودند که از روش سطح پاسخ (RSM (Response Surface Methodology)) در قالب طرح مرکب مرکزی با نرم افزار Design-Expert 12 برای پیش بینی متغیرهای مستقل بر میزان تولید رومیپلاستیم استفاده گردید.

میزان OD برابر 8/0، غلظت IPTG برابر 1 میلی مولار و محیط کشت LB بهترین حالت برای تولید پپتیبادی رومیپلاستیم نوترکیب بهینه سازی شد.

از آنجاییکه تولید بهینه پپتیبادی مورد نظر بود، کلونینگ و بهینه سازی شرایط بیان ژن و خالص سازی پپتیبادی رومیپلاستیم در سویه BL21 از باکتری اشرشیا کلی با بهینه ترین شرایط که توسط RSM انجام گردید، صورت گرفت. همچنین برای اینکه پروتیین به نحو صحیح فولد شود، از مرحله ریفولدینگ در ابتدای خالص سازی استفاده شد. پروتیین های دارویی نقش مهمی در درمان های نوین پزشکی مولکولی دارند.