همسانه سازی و بیان بالای انترفرن گامای گاوی در یاخته های اوکاریوتی (COS-7)

انترفرن گاما یکی از سیتوکین های کلیدی در تعیین پاسخ ایمنی وابسته به سلول هایT کمکی نوع یک است. در این مطالعه از بافت طحال گاو RNA تام استخراج گردید و به کمک روش RT-PCR ژن انترفرن گامای گاوی همسانه سازی شد. cDNA ژن انترفرن گاما به ناقل بیانی پستانداریpcDNA3.1(+) که تحت کنترل پیش برنده سیتومگالوویروس انسانی (CMV) است، انتقال یافت. پس از تعیین توالی ژن مشخص شد که ردیف اسید آمینه های این پروتئین با ردیف های گزارش شده در پایگاه اطلاعات ژنتیکی برای گاو (100%)، گوسفند (95%)، بز (95%)، شتر (86%)، لاما (83%)، اسب (77%)، سگ (75%)، گربه (75%)، انسان (61%)، موش (44%) و مرغ (35%) شباهت دارد. بیان ژن انترفرن گامای گاوی نو ترکیب در شرایط آزمایشگاهی با انجام آزمون الیزا تایید گردید. حداکثر بیان ژن در زمان های 96 و 144 ساعت بعد از ترانسفکشن در مایع رویی سلول های رده اپتلیال کلیه میمون (COS-7) بود. نتایج نشان می دهد که ناقل بیانی pcDNA3.1(+) و سلول های COS-7 ترانسفکت شده با روش دی اتیل آمینواتیل دکستران (DEAE) اجازه بیان ژن انترفرن گاما را داده و این پروتئین در مایع رویی کشت سلولی به خوبی ترشح می شود.