baharvand h
-
هدفهدف این تحقیق، بررسی تاثیر تغییرات اپی ژنتیک توسط تیمار با کوچک مولکول های تغییردهنده سطح اپی ژنتیک سلول در حین فرآیند ترمیم پلاناریا است.مواد و روش هاکرم های پلاناریا با استفاده از برش به سه قطعه سر، دم و تنه تقسیم و پس از انتقال به چاهک های جداگانه با 6 نوع کوچک مولکول تغییر دهنده سطح اپی ژنتیک با غلظت های مختلف تیمار شدند. برای بررسی تاثیر تیمارها بر روند فرآیند ترمیم، از ارزیابی خصوصیات ریخت شناسی در طول 20 روز پس از قطعه کردن استفاده شد.نتایجارزیابی دقیق ریخت شناسی نمونه های تیمار شده با کوچک مولکول ها نشان داد که از بین شش کوچک مولکول بررسی شده، دو کوچک مولکول سدیم بوتیرات و والپوریک اسید (مهار کننده آنزیم هیستون داستیلاز) به ترتیب باعث تاخیر در ترمیم قطعات مختلف سر، تنه و دم و تاخیر در تشکیل چشم قطعات تنه و دم می شوند. همچنین چهار کوچک مولکول دیگر شامل BIX01294، RG108، SAHA و Tranylcypromin تاثیری در فرآیند ترمیمی نداشتند و کلیه نمونه های تیمار شده به صورت طبیعی ترمیم شدند.نتیجه گیرینتایج نشان می دهند که اپی ژنتیک سلول دارای نقش کلیدی در فرآیند ترمیمی پلاناریا است و مهار فعالیت هیستون داستیلازها باعث اختلال در فرآیند ترمیم طبیعی می شود. با این وجود، تعیین دقیق مکانیسم عملکرد هیستون داستیلاز در فرآیند ترمیم پلاناریا نیاز به بررسی بیشتر دارد. امید می رود از طریق بررسی نتایج به دست آمده بتوان به درک بهتری از مکانیسم های مولکولی فعال سازی و ممانعت کنندگی ترمیم در پلاناریا و سایر موجودات دست یافت.کلید واژگان: پلاناریا، ترمیم، اپی ژنتیک، کوچک مولکولAim: In this study, we explored the effect of epigenetic modifications on planarian regeneration process by treating with small molecule epigenetic modifiers
Material andMethodsPlanaria worms were cut into 3 sections including head, trunk, and tail regions and treated with 6 small molecules with epigenetic modification effects. All samples were evaluated morphologically for 20 days to monitor the effects on regeneration process.ResultsMorphological analysis of samples treated with selected six small molecules with different epigenetic modification functions revealed that treating with two of them including Sodium butyrate and Valporic acid will result in delayed head, trunk, and tail fragments regeneration, and delayed eye formation in trunk and tail fragments, respectively. In addition, samples treated with other four small molecules including BIX01294, RG108, SAHA, and Tranylcypromine with other epigenetic modification functions, regenerated normally.ConclusionThese results indicating that different epigenetic levels and activity of histone deacetylases play a key role in planarian regeneration and inhibition of histone deacetylases activity will result in abnormal regeneration. However, further work is needed to determine the exact mechanism of histone deacetylases activity effect on planarian regeneration process. Finally, we hope to understand more about the underlying mechanism of planarian and vertebrates regeneration inhibition and activation using these findings.Keywords: Planaria, Regeneration, Epigenetic, Small molecules -
مجله سلول و بافت، سال ششم شماره 3 (پاییز 1394)، صص 421 -430هدفدر این طرح تولید سلول های بنیادی جنینی هاپلوئید پارتنوژنتیک در حضور مهارکننده های مسیرهای پیام رسانی ERK و TGF-β بررسی شده است.مواد و روش هاابتدا بلاستوسیست های پارتنوژنتیک حاصل از فعال سازی شیمیایی اووسیت ها، در محیط R2i (حاوی PD0325901 و SB431542 که به ترتیب مسیرهای پیام رسانی ERK و TGF-β را مهار می کنند) کشت شدند. سپس رده های سلول های بنیادی جنینی پارتنوژنتیک در این محیط تکثیر و نگه داری شدند. با استفاده از رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس و qRT-PCR، بیان مارکرهای پرتوانی و با روش تمایز خودبه خودی و ایجاد تراتوما پتانسیل تمایزی این سلول ها ارزیابی شدند. میزان هاپلوئیدی نیز با استفاده از روش فلوسایتومتری تعیین گردید.نتایجدر شرایط R2i، حدود 50 درصد از جنین های پارتنوژنتیک، رده سلولی تولید کردند و 10 تا 13 درصد سلول های هر رده به صورت هاپلوئیدی بودند. سلول های بنیادی پارتنوژنتیک تولید شده در محیط R2i ویژگی های سلول های بنیادی پرتوان مانند مورفولوژی، پاساژپذیری، بیان ژن های ویژه پرتوانی در سطح mRNA و پروتئین را نشان دادند. همچنین این سلول ها قادر به تمایز خودبه خودی به مشتقات سه لایه زاینده جنینی و ایجاد تراتوما بودند.نتیجه گیریمهار مسیرهای پیام رسانی ERK و TGF-β می تواند شرایط مناسبی را برای تولید سلول های بنیادی هاپلوئید از جنین های پارتنوژنتیک فراهم کند.کلید واژگان: جنین پارتنوژنتیک موش، سلول های بنیادی جنینی هاپلوئید، مسیر پیام رسانی ERK و TGF، βAim: In this project, production of haploid parthenogenetic embryonic stem cells has been studied in presence of the ERK and TGF-β signaling pathway inhibitors.
Material andMethodsFirst the parthenogenetic blastocyst- produced with chemical activation of oocytes- was cultured in R2i culture condition (containing PD0325901 and SB431542 which inhibit ERK and TGF-β signaling pathways respectively). Then parthenogenetic embryonic stem cell lines was subsequently expanded and preserved in the same culture medium. Using immunofluorescent staining and qRT-PCR, expression of the pluripotent markers were evaluated. Moreover, differentiation potential of these cells was assessed by spontaneous differentiation and teratoma formation assay. Degree of haploid in this cell lines was determined by flowcytometry methods.ResultsIn R2i culture condition, about 50% of parthenogenetic embryos produce cell lines, out of which 10-13% are haploid. Established parthenogenetic stem cell lines demonstrate pluripotent stemness characteristics including morphology, passagability as well as expression of pluripotent specific genes in mRNA and protein levels. In addition, these cells were able to differentiate spontaneously to embryonic germ layers and form teratoma.ConclusionInhibition of ERK and TGF-β signaling pathways can provide an appropriate condition for producing haploid stem cells from parthenogenetic embryos.Keywords: Mouse parthenogenetic embryo, Haploid embryonic stem cells, ERK, TGF, beta signaling pathway -
زمینه و هدفآسیب های نخاعی به عنوان یکی از حوضه های مهم تحقیقات در علوم اعصاب مطرح می باشد. دسترسی به نخاع بدون ایجاد آسیب به آن، را می توان به عنوان فصل مشترک ایجاد مدل های مختلف ضایعه نخاعی در نظر گرفت. در این میان، قسمت تحتانی نخاع سینه ای بدلیل استقرار مراکز مرتبط با ایجاد الگو های حرکتی اندام تحتانی و همچنین وجود تست های استاندارد بررسی های حرکتی، مورد توجه محققین به این ناحیه خاص شده است. با این وجود یک روش مشخص جهت دسترسی به طناب نخاعی این قسمت ارائه نشده است.روش کاردر مجموع بیست عدد موش صحرایی وارد این مطالعه شد. بدنبال القای بیهوشی، حیوان به شکم روی میز جراحی قرار داده شد. موقعیت مهره دهم شناسایی، و عضلات اطراف آن کنار زده شدند. لامینای مهره مورد نظر به کمک دریل هایی با دور تند، نازک گردید. در قدم آخر، لامینای نازک شده به آرامی و با دقت زیاد از روی طناب نخاعی کنار زده شد. پتانسیل حرکتی حیوانات قبل و بعد از جراحی بوسیله ی تست حرکتی تعیین شد.یافته هامطالعه حاضر روشی مرحله به مرحله را برای دسترسی به نخاع سینه ای موش صحرایی ارائه داده است. پروسه جراحی کمتر از یک ساعت طول کشید. بررسی حرکتی اندام تحتانی، با تست BBB، کسب نمره کامل را قبل و بعد از جراحی نشان داد.نتیجه گیریاین مقاله یک روش ساده و کاربردی را برای دسترسی نخاع سینه ای تحتانی ارائه می دهد. موقعیت آناتومیک محل جراحی، مراقبتهای حین و بعد از جراحی و سایر مسائل احتمالی بحث شده است.
کلید واژگان: موش صحرایی، ستون مهره سینه ای، برداشتن لامینا، آسیب نخاعی5Student Research Committee، Isfahan University of Medical Sciences، Isfahan، IranObjectiveSpinal cord injury (SCI) has become an especially challenging target in experimental neuroscience. Approach into the spinal cord is the interface among all different types of spinal cord injury modeling. The lower thoracic spinal cord has generated special interest due to the lower limbs’ spinal pattern generator position and presence of relative scales for behavioral assessment. However، a clear method with which to approach the thoracic spinal cord has yet to be determined.MethodsA total of 20 animals were subjected to this study. Following induction of anesthesia، the 10th thoracic vertebra were positioned، and muscles were retracted. Using the high speed rotary، the vertebral lamina were carefully thinned. As a final point، the reduced lamina was meticulously removed away to expose underlying spinal cord. Loco motor behavioral test (BBB) was implemented before and after surgery procedure.ResultsThis manuscript has presented the stepwise method to expose rat thoracic spinal cord. Whole procedure took less than an hour. Animals acquired complete BBB loco motor rating score before and after surgery; indicating the safety of procedure.ConclusionThis article introduces simple and practical approach for the rat lower thoracic spine. The anatomical orientation، anesthesia، postoperative management، and common problems are discussed.Keywords: Rat, Thoracic Spine, Laminectomy, Spinal Cord Injury -
زمینه و هدفقابلیت تمایز سلول های بنیادی جنین انسان به عنوان سلول های پرتوان، به انواع سلول های مختلف از جمله سلول های عصبی، قلبی و کبدی بررسی شده است. در این مطالعه با توجه به توانمندی سلول های بنیادی جنین انسان (Royan H5) که در پژوهشگاه رویان به صورت رده سلولی تهیه شده، بررسی قابلیت تمایز این سلول ها به سلول های خونی مورد توجه قرار گرفت. هدف مطالعه بررسی توانمندی سلول های بنیادی جنین انسان (Royan H5) در تمایز به سلول های همانژیوبلاست بود.روش بررسیسلول های بنیادی جنین انسان به صورت سوسپانسیون در محیط کامل DMEM/F12 و در حضور (ngmL100) bFGF کشت و تکثیر شدند و در روز هشت در حضور ترکیبات القاکننده به سلول های بلاست تمایز داده شدند. شاخص های سلول های بلاست KDR، CD31 و CD34 توسط فلوسیتومتری و بیان ژن های TAL-1، Runx-1 و CD34 توسط Quantitative Real Time-PCR نشان داده شد و توان کلونی زایی بلاست ها (Colony forming unit-assay) در محیط حاوی متیل سلولز ارزیابی شد.یافته هاسلول های بنیادی جنین انسان در طی تمایز به پیش سازهای خونی، جمعیتی از سلول های (5/12%±79) KDR+، (8/2%±6/5) CD31+-CD34+ و (12/2%±6) KDR+-CD31+ را به وجود می آورند. افزایش معنی دار بیان ژن های (01/0P≤، 05/0P≤) TAL-1، RUNX-1، CD34 در کلونی های چهارده روزه شاهدی بر تشکیل سلول های بلاست بود. هم چنین کلونی های شش روزه تولیدشده بر سطح ماتریژل و با ویژگی های شبه همانژیوبلاست در محیط حاوی متیل سلولز شبه کلونی های مختلط خونی و سلول های شبه اندوتلیال را ایجاد کردند.نتیجه گیریسلول های بنیادی جنینی Royan H5 قادر به تولید سلول های پیش ساز خونی با توانمندی دوگانه در شرایط آزمایشگاهی می باشند که می توانند کلونی های شبیه به کلونی های مختلط خونی و سلول های شبه اندوتلیال را تولید کنند.
کلید واژگان: سلول های بنیادی جنینی انسانی، تمایز، کلونی همانژیوبلاستBackgroundHuman embryonic stem cells (hESCs) are capable of self-renewal and large-scale expansion. They also have the capacity to differentiate into a variety of cell types including liver, cardiac and neuron cells. However, it is not yet clear whether hESCs can differentiate to hemangioblasts under in-vitro conditions. Hemangioblasts are bipotential progenitors that can generate hematopoietic lineages and endothelial cells. The aim of this study was to identify the potential of human Royan H5 embryonic stem cells in differentiating into hemangioblast cells.MethodsHESCs were cultured at suspension system in DMEM/F12 supplemented with bFGF. 7-day old cells differentiated into blast cells under defined condition consisting of hematopoietic cytokines including BMP4, VEGF, etc. Blast cell markers kinase insert domain receptor (KDR), CD31, and CD34 were evaluated by flow cytometry and blast gene expressions (TAL-1, Runx-1 and CD34) were detected by qRT-PCR. Clonogenic assays were performed in semisolid medium by colony forming unit-assays.ResultsThe hESCs (Royan H5) had the capacity of differentiating into hemangioblast cells. We could detect colonies that expressed 79%±12.5 KDR+, 5.6%±2.8 CD31+-CD34+ and 6%±2.12 KDR+-CD31+ on day 8 in the hESCs. Up-regulation of TAL-1, Runx-1 and CD34 occurred during hemangioblast commitment (P≤0.05 and P≤0.01, respectively). Moreover, hemangioblast cells generated mixed-type and endothelial-like colonies in semi-solid media.ConclusionOur results showed that hESCs (Royan H5) were able to differentiate into hemangioblasts under in-vitro conditions. The hemangioblasts had the potential to generate two non-adherent (Mixed-type) and adherent (endothelial-like) cell populations. -
هدف
پیوند MSCs (Marrow MesenchymalStem Cells) و پیش ساز های شبه عصبی مشتق از آن ها (NLPs: Neural like progenitors) به مدل ضایعه نخاعی و زنده مانی، مهاجرت و توانمندی های تمایزی این سلول ها درحیوانات مدل
مواد روش هاNLPs از MSCs (القا شده با bFGF، hEGFو رتینوییک اسید) به دست آمده و با استفاده از روش های فلوسیتومتری و رنگ آمیزی ایمونو فلورسنس تجزیه و تحلیل شد. سپس سلول های MSCs و NLPsبه موش های دچار ضایعه نخاعی از طریق ورید دمی تزریق شدند. همچنین محل ضایعه نیز با داربست کلاژنی پر شد. آزمون های رفتاری به صورت هفته ای تا 5 هفته بعد از پیوند انجام شد.
یافته هاروند بهبود حرکتی و حسی حیوانات پس از پیوند سلولی طی پنج هفته مطالعه شد. هیچ گونه تغییر قابل توجهی در زمینه بهبود وضعیت عملکرد نخاع پس از پیوند سلولی در حیوانات مورد مطالعه مشاهده نشد. همچنین با استفاده از روش ایمونوفلورسنس و آنتی بادی های) HNU (Human neuclaer antigen و BrdU زنده مانی و مهاجرت سلول ها در مقاطع بافتی بررسی شد و در مجاورت بخش های سری-دمی محل ضایعه سلول های پیوند شده قابل ردیابی بود.
نتیجه گیریبا وجود بیان نشانگر های اختصاصی نورونی در محل ضایعه توسط MSCs و NLPs این سلول ها نمی توانند موجب بهبود کامل ضایعات نخاعی شوند و هنوز سئوالات بسیار زیادی در مورد مکانیسم عملکرد این سلول ها وجود دارد که باید به آن پاسخ داد.
کلید واژگان: سلول های بنیادی مزانشیمی، سلول های پیش ساز شبه عصبی، ضایعه نخاعی، موش صحرایی، داربست کلاژنیPurposeThe aim of the present study was to investigate transplantation of MSCs and their- derived Neural like progenitors (NLPs) into the spinal cord after injury and evaluate the survival, migration, differentiation properties of these cells in Rat spinal cord.
Materials And MethodsNLPs were derived from MSCs (induced by bFGF(Fibroblast growth factor b), hEGF (Human Epidermal growth factor) and RA (Retinoic Acid)), and analyzed by flowcytometry and immuno fluorescence staining. MSCs and NLPs injected into model animals vein and collagen scaffold implanted into injured site. Behavioral testing was performed weekly for 5 weeks.
ResultsImprovement of transplanted animals evaluated after 5 weeks. Unfortunately, Substantial changes were not observed among the rats after the transplantation. Immuno fluorescence staining analysis using human nuclei and BrdU antibodies confirmed survival and migration of hMSCs and NLPs into the injury site. Transplanted cells were found to adjacent segments located rostro-caudaly to the injury epicenter.
ConclusionOur findings indicate that hMSCs and NLPs couldnt facilitate recovery from spinal cord injury. However, these cells can express specific neuronal markers in injured site. There are many questions to be answered regarding this mechanism.
-
جداسازی و کشت موفق سلول های بنیادی پرتوان انسانی شامل سلول های بنیادی جنینی (hESCs) و پرتوان القایی انسانی (hiPSCs) در شرایط آزمایشگاهی پتانسیل و امید های جدیدی را برای کاربرد های درمانی مانند مهندسی بافت و پزشکی ترمیمی ایجاد کرده است. با این وجود، اغلب کاربرد های درمانی این سلول های ارزشمند نیازمند تولید مقادیر زیادی سلول هدف با خصوصیات کاملا مشخص، تعریف شده و یکسان است. از این رو، کاربردی شدن یافته های ارزشمند آزمایشگاهی مستلزم توسعه سیستم های کشت پویا، مقیاس پذیر، با کارایی بالا و قابل اعتمادی است که قادر باشد سلول های مورد نظر را در مقیاس بالا، تحت شرایط کاملا کنترل شده و خصوصیات کاملا مشخص و یکسان تکثیر کند. توسعه موفق سیستم کشت برای اهداف درمانی نیز نیازمند شناسایی و بررسی دقیق عوامل موثر بر تکثیر، حفظ خودنوزایی و تمایز سلول های بنیادی جنینی و پرتوان القایی انسانی مانند تاثیر رده سلولی، اجزای محیط کشت، شرایط کشت و سیستم کشت است که در سال های اخیر مورد توجه بسیاری از محققین قرار گرفته است. مقاله حاضر مروری بر آخرین پژوهش های مرتبط و دستاورد های به دست آمده در زمینه طراحی سیستم کشت برای تکثیر سلول های مذکور در مقیاس بالا و چالش های پیش رو است.
کلید واژگان: سلول های بنیادی جنینی انسان، سلول های پرتوان القایی انسان، تکثیر در مقیاس بالا، سلول درمانیSuccessful isolation, derivation and culturing of human pluripotent stem cells, including human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem (hiPSCs) cells in laboratory scale has opened new horizones for cell therapy applications such as tissue engineering and regenerative medicine. However, most of the cell therapy protocols using these unique cells require large number of fully defined and well-characterized cells with uniform properties. Hence, translating these valuable findings from laboratory scale research to clinical applications would involve development of robust dynamic and scalable culture systems being capable of producing large number of uniform and well-characterized cells under fully controlled conditions. Identification and meticulous investigation of most important parameters affecting on the performance of expansion, self renewal and differentiation of human pluripotent stem cell cultures such as cell line, culture medium, culture conditions and culture system are prerequisite steps for successful culture system development, which have attracted growing attention from researchers in recent years. This review will focus on recent research advances and achievements in culture system development for human pluripotent stem cells as well as current challenges in this filed. -
هدفجداسازی سلول های پیش ساز مزانشیمی حاصل از سلول های بنیادی پرتوان القایی به عنوان یک منبع جدید از سلول های مزانشیمی که قادرند به انواع رده های سلولی از جمله سلو ل های چربی و استخوان تمایز یابند.مواد و روش هابعد از 7 روز کشت سلول های بنیادی پرتوان القایی در محیط کشت روی ماتریژل، سلول های دوکی شکل که در اطراف کلونی هاوجود داشتند، با Cell scraper جداشدند. سلول های جدا شده که مورفولوژی شبیه سلول های مزانشیمی داشتند بعد از 4 تا 6 پاساژ، برای تعیین ماهیت بررسی شدند. تعیین ماهیت سلول ها با مطالعه نشانگرهای سطحی مزانشیمی 31CD، 105CD، 29CD، 44CD، 90CD و73CD نشانگرهای سطحی هماتوپویتیک 34CD و 45CD با استفاده از روش فلوسیتومتری و نیز تمایز به رده های استخوانی و چربی صورت گرفت.یافته هانتایج به دست آمده از فلوسیتومتری نشان داد که سلول های پیش ساز مزانشیمی مشتق شده از سلول های بنیادی پرتوان القایی 14/0 ± 71/98% نشانگر 44CD، 02/1±51/98% نشانگر 29CD، 41/3±74/87% نشانگر 105CD، 76/5±65/46% نشانگر 73CD، 78/0±53/98% نشانگر 90CD که نشانگرهای اختصاصی سلول های مزانشیمی است را بیان می کردند و همچنین نشانگرهای 34CD و 45CD که نشانگرهای اختصاصی سلول های هموتوپویتیک است را در سطح خود بیان نکردند. به علاوه با استفاده از محیط های تمایزی مخصوص رده استخوانی و چربی، سلول ها قادر بودند به این دو رده سلولی تمایز یابند.نتیجه گیریاین مطالعه نشان می دهد که سلول های بنیادی پرتوان القایی قادرند به سلول های پیش سازمزانشیمی تبدیل شوند و سلول های حاصل قادرند به عنوان منبع جایگزینی برای سلول های مزانشیمی مورد استفاده قرار گیرند.
کلید واژگان: سلول های بنیادی پر توان القایی، سلول های پیش ساز مزانشیمی، تمایزPurposeIsolating human induced pluripotent stem cells (hiPS)-derived mesenchymal progenitors as a new source of mesenchymal cells which can differentiate into different lineages like adipose and bone.Materials And MethodsAfter 7 days of hiPS1 culture on matrigle coated dishes, spindle like cells around colonies were removed by cell scraper. These cells that had mesenchymal like morphology was characterized after 4-6 passages. Mesenchymal cell surface markers CD73, CD90, CD105, CD29, CD44 and hematopoietic cell surface markers CD34 and CD45 were analyzed by flow cytometry and cells were differentiated to osteogenic and adipogenic lineages by defined medium.Resultsflow cytometric analysis demonstrated that hiPS1 derived mesenchymal progenitors were %98.71 ± 0.14 CD44+, %98.51 ± 1.02 CD29+, %87.74 ± 3.41 CD105+, %46.65 ± 5.76 CD73+, %98.53 ± 0.78 CD90+ and they did not express CD34 and CD45. These cells could be differentiated to osteogenic and adipogenic lineages.ConclusionhiPS1 can make mesenchymal progenitors and these cells can be a suitable substitute for mesenchymal stem cells. -
هدفمقایسه اثر ماتریکس های برون سلولی لامینین و ژلاتین بر کشت کوتاه مدت سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی نوزاد موشمواد و روش هاسوسپانسیون حاوی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی (SSCs) از بیضه موش 6 روزه جدا شده و در ظروف کشت پوشیده با لامینین و ژلاتین که از قبل آماده شده بود، به طور جداگانه در حضور فاکتورهای رشد GDNF (Glial derived neuroterophic factor)، EGF ((Epidermal Growth Factor و Basic Fibroblastic Growth Factor) bFGF به مدت نه روز کشت شد. تعداد کلونی های SSC تشکیل شده و مساحت آن ها در روزهای پنجم، هفتم ونهم در هر گروه اندازه گیری شد، همچنین در روز نهم پس از کشت از رنگ آمیزی ایمونوفلورسنت برای بررسی کیفی بیان نشانگرهای α6-Integrin، β1-Integrin در هر دو گروه استفاده شد و درصد بیان نشانگرهای فوق با استفاده از آزمون فلوسایتومتری مقایسه شد.یافته هارنگ آمیزی ایمونوفلورسنت نشان داد که کلونی ها متشکل از SSCs و برای نشانگرهای α6-Integrin/ β1-Integrin مثبت بود. تعداد کلونی های ایجادشده روی ظروف کشت پوشیده با لامینین به طور معنی داری نسبت به ظروف کشت پوشیده با ژلاتین بیشتر بود، درحالی که مساحت کلونی ها در گروه لامینین کاهش معنی داری نسبت به گروه ژلاتین داشت. براساس نتایج فلوسایتومتری درصد سلول های بیان کننده این ژن ها طی کشت در دو گروه تفاوت معنی داری نداشتند.نتیجه گیریاستفاده از ماتریکس برون سلولی لامینین در کشت سلول های اسپرماتوگونی نوزاد موش به صورت معنی داری موجب افزایش تعداد کلونی های SSC و در عین حال کاهش مساحت آن ها می شود (p≤0.05).
کلید واژگان: سلول های بنیادی اسپرماتوگونی، نوزاد موش، لامینین، ژلاتینPurposeTo compare the effect of laminin and gelatin on short-term culture of spermatogonial stem cells (SSCs) from neonatal mouse testes.Materials And MethodsCell suspension containing SSCs were isolated from testes of 6 day-old mice and cultured in the presence of Glial-derived neuroterophic factor (GDNF), Epidermal Growth Factor (EGF (and Basic Fibroblastic Growth Factor) bFGF) on laminin- and gelatin- coated plates for 9 days. Number and area of colonies were measured in 5th, 7th and 9th days after culturing. At 9th day Immunostaining was used to detect expression of SSC markers, α6-Integrin and β1-Integrin. moreover, the colonies were harvested and the percentage of α6-Integrin and β1-Integrin positive cells was assessed by flowcytometery in both groups.ResultsImmunostaining analysis showed that our culture system contained SSC colonies as they were positive for α6-Integrin and β1-Integrin. Additionally, the number of colonies those were formed on laminin were significantly higher in comparison with those of other group. but colony area was higher on gelatin. There was no significant difference in percentage of cells that expressed α6-Integrin, β1-Integrin detected by flowcytometry in both groups.Conclusionlaminin as extracellular matrix cause to increase the number of neonate spermatogonial colonies and decrease the area of them (P≤0.05).Keywords: Neonatal mouse, Spermatogonial stem cell, Laminin, Gelatin -
هدفارزیابی تغییرات فراساختاری تخمک های گوسفند پس از انجماد شیشه ای و بلوغ آزمایشگاهیمواد و روش هاتوده های (COC) Cumulus-Oocyte Complexes دارای کیفیت خوب به چهار گروه، غیرانجمادی کنترل، انجمادی Conventional straw، Cryotop و Solid Surface تقسیم شدند. در گروه های Conventional straw وCryotop، توده های منجمد شیشه ای شده مستقیما در نیتروژن مایع غوطه ور شدند؛ درحالی که در گروه Solid Surface، توده های منجمد شیشه ای شده ابتدا سرد و سپس به نیتروژن مایع منتقل شدند. توده های سالم تازه و منجمد - ذوب شده در شرایط آزمایشگاهی بالغ و تغییرات فراساختاری تخمک های آن ها ارزیابی شد.یافته هانتایج نشان داد که انجماد شیشه ای با روش های Cryotop و Solid Surface بر خلاف روش Conventional straw سازمان دهی کلی اووپلاسم را حفظ کرده بود. به علاوه پس از انجماد شیشه ای، تعداد واکوئل ها در اووپلاسم افزایش یافته بود، گروهی از آن ها به صورت جزیی یا کامل با چربی پر شده و گروهی نیز دارای داربست میکروفیلامنتی بود. همچنین در تخمک های بالغ از تعداد و تراکم گرانول های قشری پس از انجماد Conventional straw و Solid Surface کاسته شده بود.نتیجه گیریانجماد شیشه ای با روش Cryotop در مقایسه با سایر روش های انجمادی می تواند فراساختار تخمک ها را به خوبی حفظ کند و شرایطی شبیه گروه کنترل را ایجاد نماید.
کلید واژگان: انجماد شیشه ای، بلوغ آزمایشگاهی، تخمک، گوسفندPurposeOur aim was determination of the sheep oocytes ultrastructural changes follow vitrification and in vitro maturation.Materials And MethodsGood quality isolated cumulus-oocyte complexes (COCs) were randomly divided into non-vitrified control, conventional straw, cryotop and solid surface vitrification groups. In the conventional and cryotop methods the vitrified COCs were plunged directly into liquid nitrogen (LN2), whereas in the solid surface group the vitrified COCs were cooled before plunging into LN2. Fresh and vitrified-warmed healthy COCs were matured in vitro and then their ultrastructural changes were evaluated.ResultsThe results indicated that vitrification by cryotop and solid surface methods preserved the total arrangement of the ooplasm, whereas conventional straw vitrification disturbed the ooplasm organization. Additionally, the number of vacuoles in the ooplasm increased after vitrification, some of these vacuoles were filled partially or completely with lipids and some had filamentous scaffolding. Also, in the mature oocytes, the amount and the density of cortical granules decreased after conventional straw and solid surface vitrification.ConclusionCryotop group compared with other vitrification methods could preserve oocyte ultrastructure properly and create a condition the same as like as the control group.Keywords: Vitrification, In vitro maturation, Oocyte, Sheep -
ایجاد مدل حیوانی ابزاری است کاربردی برای مطالعات بالینی که در مطالعات بیماری های کبدی از اهمیت ویژه ای برخوردار است. برای استفاده بهینه از این ابزار بایستی استانداردهایی در راستای ایجاد و ارزیابی خلق شود تا نتایج به دست آمده از آزمایش های گوناگون با یکدیگر قابل مقایسه شود. در میان بیماری های کبدی موجود که با استفاده از مدل سازی روی حیوانات مطالعه می شوند، فیبروز و سیروز اهمیت خاصی دارد، زیرا اولا شرایط بیماری تقریبا ساختار یکنواختی در تمام بیماران داشته و ثانیا میزان شیوع این بیماری ها به دلیل آنکه در مراحل آخر همه بیماری های کبدی ایجاد می شوند، بسیار بالاست. روش های مختلف مدل سازی در این زمینه مثل استفاده از سموم کبدی و اعمال جراحی آزمایش شده و مزایا و معایب هر کدام تا حدی مشخص شده است. واضح است که استفاده از این مدل ها، مکانیسم های تولید بیماری و بهبود را تا حد زیادی آشکار و قابل مطالعه خواهد ساخت که در اینجا مکانیسم تولید وبهبود فیبروز توضیح داده شده است. همچنین در این بررسی سعی شده است تا با توجه به مدل های مختلف حیوانی که در سراسر دنیا برای مطالعه بیماری های کبدی استفاده می شوند، نکات اصلی درنحوه انتخاب حیوان، ایجاد وارزیابی مدل در مطالعات به صورت تخصصی تر توضیح داده شود.
کلید واژگان: مدل حیوانی، بیماری های کبدی، فیبروز، سیروزAnimal modeling is a crucial necessity in clinical studies of liver diseases. Authenticity of the data which are produced using this tool under different conditions and accuracy of the analyses and assessments which would be based on such data sets is completely dependent on the adoption of a standardized methodology for analyzes and assessment of these data sets. Cirrhosis and Fibrosis are among the most important diseases which are studied by animals modeling due to the fact that their final structure is usually similar among a verity of patients and also because they are the common end stage of most chronic liver diseases. Up to now different approaches such as hepatotoxicity and surgical methods have been utilized to obtain cirrhotic or fibrotic models that either of which has its especial advantages and disadvantages. It is obvious that using models could indicate the production and treatment mechanisms of disease which we elucidate Fibrosis and cirrhosis here. Considering several animal models which were used for liver disease in the world in this survey we try to explain why what and how an animal must be choosen for modeling and how could be evaluated.
Keywords: Animal model Liver disease Fibrosis Cirrhosis -
از مهمترین سلول های بنیادی Stem cells بزرگسالان که امروزه توجه اکثر محققین را به خود جلب کرده است می توان به سلول های بنیادی مزانشیمی Mesenchymal stem cells اشاره کرد. سلول های بنیادی مزانشیم در ترمیم بافت هایی با منشاء مزانشیمی شرکت می کنند و البته این سلول ها به عنوان سلول های حمایت کننده برای سلول های هماتوپویتیک در مغز استخوان نیز هستند. این سلول ها برای اولین بار توسط Friedenstein و Petrakova از مغز استخوان رت به دست آمدند. در دسترس ترین منبعی که برای استفاده از این سلول ها پیشنهاد می گردد همان مغز استخوان است، گرچه این سلول ها از منابع دیگری نیز قابل جداسازی هستند. جداسازی، تکثیر به نسبت راحت آنها از مزایای استفاده از این نوع سلول هاست. علاوه بر این، اکثر مطالعات آزمایشگاهی نشان داده اند که این سلول ها توانایی گریز از سیستم ایمنی را دارند و پاسخ ایمنی را مهار می کنند که هر دوی این ویژگی ها از نکات مهم در پیوند
Human bone marrow mesenchymal stem cells (hMSCs) can differentiate into several types of mesenchymal cells, including osteocytes, chondrocytes, and adipocytes, but can also differentiate into non-mesenchymal cells, such as neural cells, under appropriate experimental conditions. Until now, many protocols for inducing neuro-differentiation in MSCs in vitro have been reported. In this study, we induced differentiation into neural phenotype in the hMSCs population by new protocol. In this treatment, hMSCs could express neural markers more than other reports, associating with remarkable morphological modifications
-
IntroductionFor tissue engineering of the urinary tract system, cell culture requires to be established in vitro and an appropriate matrix acting as cell carrier should be developed. The aim of the present study was to assess the proliferation quality of mouse urothelial cells on 3 natural matrixes of human amniotic membrane (AM), peritoneum, and omentum, and to compare them with collagen matrix.Materials And MethodsMouse urothelial cells were isolated by collagenase IV, and the urothelial cells (105 cells per milliliter) were cultured on the AM, peritoneum, omentum, and collagen. The pattern of growth and asymmetric unit membrane formation were analyzed by histologic examination and immunocytochemistry on the detached urothelium with pancytokeratin and uroplakin III, respectively. Electron micrographs were taken and cell layers, organelles, desmosomes, and junctions were studied.ResultsImmunocytochemistry of cultivated cells confirmed the urothelial cells phenotype. Up to 4 cell layers were obtained on the AM and 1 to 2 layers on the peritoneum. Distribution of the urothelial cells on the omentum was not favorable, which was due to its large pores. Cell proliferation started later on the AM (7th day) compared to collagen (3rd day). Also, apoptosis started later on the AM (after 14 days) compared to collagen (7 days).ConclusionThese results showed that the AM can act as a cell carrier for culture of the urothelial cells, and its exceptional properties such as having various growth factors, availability, and cost-effectiveness make it a unique biological matrix for urothelial culture.
-
هدفارزیابی نتایج اولیه پیوند اتولوگ یاخته های بنیادی کشت داده شده بر روی پرده آمنیون در مبتلایان به نقص کامل یک طرفه یاخته های بنیادی لیمبوس.
روش پژوهش: مطالعه بر روی 4 چشم از 4 بیمار مبتلا به نقص کامل یک طرفه یاخته های بنیادی لیمبوس ناشی از سوختگی شیمیایی یا حرارتی انجام شد. جهت تایید نقص کامل یک طرفه یاخته های بنیادی لیمبوس، در همه موارد، ایمپرشن سیتولوژی انجام شد. از لیمبوس چشم سالم تحت بی حسی موضعی، قطعه ای برداشته و بر روی پرده آمنیون کشت داده شد. دو هفته بعد، گسترده یاخته ای به دست آمده از کشت، به روش استاندارد، در چشم معیوب پیوند گردید. بیماران به فواصل منظم بعد از عمل پیگیری شدند. در ویزیت های پی گیری، علاوه بر معاینه کامل بالینی، به ویژه عود یا پیشرفت وسکولاریزیشن، میزان کدورت قرنیه و ترمیم نقص اپی تلیومی مورد توجه قرار گرفت و تصویربرداری دیجیتالی انجام شد. در همه موارد، ایمپرشن سیتولوژی بعد از جراحی نیز انجام گردید.یافته هابیماران بین 5 تا 13 ماه پیگیری شدند. در سه مورد کاهش کدورت و وسکولاریزیشن قرنیه به وضوح دیده شد. ایمپرشن سیتولوژی، نشان دهنده ماهیت قرنیه ای اپی تلیوم پوشاننده قرنیه در هر 3 مورد بود. تغییرات ملتحمه ای در یک با 2 قطاع قرنیه در هر سه مورد وجود داشت ولی قرنیه این 3 بیمار، آماده پیوند قرنیه جهت بازتوانی دیده بود. یک مورد با شکست مواجه شد؛ به طوری که تغییرات ملتحمه ای در کل سطح قرنیه وجود داشت. پس از جراحی، دید بیماران در همه موارد بهبود یافت.نتیجه گیریپیوند اتولوگ یاخته های بنیادی کشت داده شده بر روی پرده آمنیون، به نظر، روشی موثر برای پیوند یاخته های لیمبوسی است. اظهارنظر قطعی، به پیگیری بلندمدت این بیماران و نیز نتایج طولانی مدت بعد از پیوند قرنیه نیاز دارد.
PurposeTo report the early results of transplantation of autologous limbal stem cell cultivated on amniotic membrane in total limbal stem cell deficiency.MethodsFour eye of 4 patients with total unilateral stem cell deficiency secondary to severe chemical or thermal burn were included. Stem cell deficiency was confirmed with impression cytology in all cases. Under topical anesthesia, a small limbal sector (11 mm) was removed from the sound eye and cultivated on amniotic membrane. Cell expansions were transplanted to the affected eye 2 weeks later. Patients were regularly followed up. At each follow-up visit, a complete eye examination with special attention to recurrence or regression of vascularization, corneal opacification, and healing of epithelial defect was performed. Digital imaging was performed at each follow-up visit. Impression cytology was repeated in all cases after surgery.ResultsThe patients were followed for 5-13 months. Decrease in corneal opacification and vascularization was obvious in 3 cases, in which the surface of the cornea was covered with corneal epithelium. Sectoral conjunctivalization was evident in these 3 cases, but their corneas were ready for corneal transplantation. The procedure failed in one case with total corneal conjunctivalization. Visual acuity improved in all cases.ConclusionAutologous cultivated stem cell transplantation on amniotic membrane seems to be an effective way for stem cell transplantation. More definite judgment needs longer follow-up together with long-term results of corneal transplantation in these patients.Keywords: limbal stem cell deficiency, amniotic membrane, cultivated stem cell transplantation, ex vivo expansion -
هدفمطالعه ویژگی های فراساختار و تجلی ژنها در سلولهای بنیادی لیمبال کشت شده بر پرده آمنیون و مقایسه آن با بافتهای طبیعی ملتحمه، لیمبال و قرنیه سالم.مواد و روش هاروش های (Revers Transcriptase Polymerase Chain Reaction) RT-PCR، ایمنوسیتوشیمی و ایمنوبلات به منظور بررسی تجلی ژنهای موثر در حفظ خصوصیات بنیادی (Stem ness)، تمایز یا تکوین اپیتلیوم قرنیه در نمونه های تازه تهیه شده لیمبال، قرنیه، ملتحمه انسانی و سلولهای لیمبال کشت شده بر پرده آمنیوتیک، در زمان های متفاوت مورد استفاده قرار گرفتند. روش میکروسکوپ الکترونی نیز برای بررسی فراساختار سلولهای کشت شده و بافتهای مربوط استفاده شد.یافته هاپس از 2-3 هفته، سلولهای کشت شده صفحه ای به اندازه تقریبی 2 2 سانتی متر مربع را بر پرده آمنیوتیک برهنه (فاقد سلول) تشکیل دادند. سلولهای کشت شده در تمام مراحل کشت از نظر بیان ژن P63+، Pax6+، Oct4+K3- بودند. بیان ژن K12 و کانکسین 43 پس از 14 روز کشت ظاهر شد و با افزایش زمان کشت افزایش یافت، در حالی که بیان ژن P63با افزایش زمان کاهش یافت. مقایسه سلولهای کشت شده با نوع طبیعی آن نشان داد که بافت لیمبال دارای ژنهای K3-/K12-/P63+/Oct4+/PAX6+ و بافت قرنیه دارای ژن P63-/K3+/K12+/Oct4+/PAX6+ و بافت ملتحمه نیز دارای ژنهای P63+/K3-/K12+/Oct4+/PAX6+ بودند. بررسی فراساختار سلول های لیمبال کشت شده نشان دهنده شباهت های فراوانی بین این سلول ها و اپیتلیوم قرنیه طبیعی بود.نتیجه گیرینتایج نشان داد که سلول های لیمبال کشت شده جمعیت هتروژنی متشکل از سلول های بنیادی، سلول های پیش ساز و سلول های تمایز یافته هستند. همچنین هر چند که سلول های کشت شده واجد ساختار و اندامک های نابالغ درون سلولی بودند اما از نظر ساختار و ویژگی های درون سلولی مشابه نمونه طبیعی بودند.
کلید واژگان: پرده آمنیوتیک انسانی، سلول های بنیادی لیمبال، قرنیه، فراساختارPurposeThe present study intends to show the characteristics of cultured limbal stem cell (CLSCs) and to compare them with normal Conjunctival (C) Limbal (L) and Cornea (K) tissues.Materials And MethodsThe expressions of a set of genes potentially involved in differentiation and stemness function of limbal stem cells were assessed in freshly prepared limbal corneal and conjunctival tissues by Immunocytochemistry Immunoblot and RT-PCR. Also ultra structure of limbal explants was cultured on human amniotic membrane (HAM) and normal tissues were evaluated by scanning electron microscopy and transmission electron microscopy.ResultsPAX6 and OCT4 were expressed in limbal conjunctival and corneal tissues. However K3 were expressed only in corneal and K12 in both tissues. The gene K3 was not expressed in limbal cultured explants (LCEs) whilst OCT4 was expressed in all stages. The expression of K12 and Cx43 increased over time in-vitro. Whereas p63 expression was reduced. Ultrastructure analysis of the LCEs showed typically immature organization of intracellular organelles and architecture.ConclusionsOur data suggest that limbal tissues are heterogeneous; containing both precursor cells and some differentiated epithelial cells. An epithelial cell sheet grown from a limbal explant on HAM retains important physiological and structural characteristics almost similar to normal limbal epithelium. Although specific markers of LSCs still remain to be identified there is an increasing need to also determine factor(s) involved in their stemness.Keywords: HUMAN AMNIOTIC MEMBRANE CORNEAL CONJUNCTIVAL LIMBAL STEM CELLS -
هدفارزیابی کشت یاخته های بنیادی لیمبوس قرنیه انسانی با حفظ خواص ذاتی و قدرت تکثیری آنها در آزمایشگاه به منظور پیوند در بیماران دچار نقص یاخته های بنیادی ناحیه لیمبوس.
روش پژوهش: نمونه های لیمبوس حاوی یاخته های بنیادی، از بانک چشم جمهوری اسلامی ایران تهیه شد. کشت قطعات لیمبوس بر روی پرده آمنیونی بدون یاخته (برهنه) به مدت 21 روز صورت پذیرفت. موفولوژی یاخته ها پس از 13 و 21 روز کشت، توسط ایمونوسیتوشیمی، با استفاده از پادتن های کانکسین 43 کراتین – 3 و پان سیتو کراتین و بیان ژن های اختصاصی قرینه با روش RT-PCR مورد بررسی قرار گرفت.یافته هاپس از 2 تا 3 هفته یاخته های اپی تلیوم لیمبوس، صفحه ای در اندازه تقریبی 2×2 cm2 بر روی پرده آمنیونی برهنه تشکیل دادند. مطالعه هیستولوژی صفحه اپی تلیومی تشکیل شده نشان داد که این یاخته ها متشکل از 4-1 لایه یاخته ای بین محل قرارگیری قطعه بافتی و حاشیه کشت می باشند. بررسی های ایمونوسیتوشیمی با استفاده از نمونه های لیمبوس و قرینه طبیعی و لیمبوس کشت شده، نمایانگر بیان کراتین -3 و کانکسین -43 در نمونه های قرنیه طبیعی بود ولی بیان ضعیفی از این نشانگرها در یاخته های کشت شده دیده شد. هم چنین تحلیل داده های RT- PCR نشان داد که ژن P63 وK12 هم در یاخته های لیمبوسی کشت شده و هم در نمونه های لیمبوس طبیعی بیان می گردد؛ در حالی که در قرنیه، تنها بیان ژن های K3و k12 دیده شده و بیان P63 مشاهده نشد.نتیجه گیریمطالعه نشان داد که یاخته های لیمبوسی طی 21 روز کشت خواص بنیادی خود را از نظر موفولوژی و بیان ژن های خاص آن ناحیه حفظ نمودند و می توان از آنها برای درمان بیماران دچار نقص یاخته های بنیادی لیمبوسی استفاده نمود.
PurposeTo evaluate the properties of cultured limbal stem cells for corneal surface reconstruction.MethodsSpecimens of limbal explants were prepared from the Eye Bank of I.R. Iran. The explants were cultured and expanded on acellular amniotic membrane for 21 days. The cultured cells were evaluated for expression of Connexin 43 and keratinine K3 by immunocytochemistry and expression of K12 keratinine and P63 by RT-PCR.ResultsAfter 2 to 3 weeks, the limbal epithelial cells grew to form a sheet approximately 2×2 cm2 in size on the amniotic membrane. On histological examination the epithelial sheet was composed of 4 to 5 cell layers at the margin of the sheet and from 1 to 4 cell layers in the area between the margin and the original explant tissue. Immunocytochemistry analysis showed Keratinine K3 and Connexin 43 were expressed in normal cornea. The markers were expressed weakly in cultured limbal cells. Also, RT-PCR analysis revealed that P63 and K12 were expressed in cultured and normal limbal cells. The normal cornea expressed K3 and K12 but not P63.ConclusionsThese data support the notion that expansion of limbal stem cells on amniotic membrane can be used of tranplantation to patients with limbal stem cell deficiency.Keywords: limbal stem cells, corneal markers, amniotic membrane -
Chronotropic Characteristics of Cardiomyocytes Differentiated from Mouse Embryonic Stem CellsObjective
The study of mammalian cardiac tissue development is hampered by the lack of a suitable in vitro model. Embryonic stem (ES) cells are pluripotent cells able to differentiate into derivatives of the three primary germ layers including cardiomyocytes. The aim of the present study was to investigate whether ES-derived cardiomyocytes react in respect to the chronotropic activities of adrenergic and cholinergic agents. Mateirals and
MethodsEmbryonic stem cells of line Royan B1 were cultivated to produce embryoid bodies in hanging drops for 2 days and in bacterial dish for 5 days, then in tissue culture dish for 14 days. Chronotropic characteristics of spontaneously differentiated cardiomyocytes evaluated by isoprenaline (b1- adrenergic receptor agonist), phenylephrine (a1-adrenergic reaptor agonist), propanolol, (b-aderergic receptor antagonist), carbacol (muscarinic receptor agonist) and Bay K (Ca+2 channel activator) during 3 steps of differentiation (early, intermediate and terminal stages). Immunocytochemistry evaluated with antibodies against a-actinin, desmin, troponin I, and connexin 43.
ResultsIsopernalin, phenylephrin and Bay K increased the beats/min-1 and carbacol and propanolol reduced the beats/min during different steps. Immunocytochemistry of the cells showed a-actinin, desmin, troponin I and gap jucntion proteins.
ConclusionThese results showed this system can be useful as a test procedure for investigating the action of chrotropic drugs thus avoiding the use of alive animals for the prepartion of primary cultures of neonatal cardiac myocytes and a suitable system for developmental biology studies.
-
هدفتا کنون تلاش های گسترده ای برای تسهیل کردن و بهبود بخشیدن به روش های انجمادی جنین ها به منظور نگهداری طولانی مدت آنها صورت گرفته است. همچنین برای تکوین بهتر جنین ها سیستم های کشت مختلفی طرح ریزی شده و مورد آزمایش قرار گرفته است، سیستم کشت همزمان و محیط های کشت متوالی از آن موارد می باشند. هدف مطالعه حاضر بهبود تکوین جنین های تک سلولی پس از انجماد شیشه ای است. به این منظور و به دلیل مزایای هر یک از دو روش هم کشتی و محیط های کشت متوالی، میزان تاثیر به کارگیری همزمان این دو روش بر تکوین جنین های تک سلولی موش حاصل از انجماد شیشه ای مورد بررسی قرار گرفت.مواد و روش هادراین مطالعه 26 ساعت پس از تزریق هورمون کوریونی انسان به موش های نژاد NMRI، جنین های تک سلولی از موش های دارای پلاک واژنی گرفته شد. نیمی از جنین ها پس از انجماد به روش انجماد شیشه ای با محلول اتیل گلیکون 40% پس از ذوب به محیط های کشت 2R-1R (آزمون 1)، Vero+(2R-1R) (آزمون 2) و نیم دیگر به صورت منجمد نشده به 2R-1R (کنترل 1) و نیز Vero+(2R-1R) (کنترل 2) منتقل گردید و تا 120 ساعت پس از کشت، تکوین جنین ها ثبت شد. نتایج حاصل از گروه های فوق با روش آماری Chi-square و فیشر با هم مقایسه شد.
نتایج و بحث: Vero+(2R-1R) در گروه غیر انجمادی در محیط های 2R-1R و میزان تشکیل بلاستوسیت، 120 ساعت پس از کشت اختلاف معنی داری نداشت. همچنین میزان دژنراسیون جنین ها نیز در این دو محیط تقریبا برابر بود. اما میزان تشکیل بلاستوسیت جنین های انجمادی در همین محیط ها برای گروه های آزمون 1 و 2 اختلافی معنی داری نشان داد و به طوری که تعداد بلاستوسیت ها در محیط هم کشتی بسیار بالاتر از غیر هم کشتی بد. دژنراسیون جنین ها نیز در محیط هم کشتی کاهش معنی داری نسبت به گروه غیر هم کشتی بسیار بالاتر از غیر هم تکشتی بود. دژنراسیون جنین ها نیز در محیط هم کشتی کاهش معنی داری نسبت به گروه غیر هم کشتی نشان داد. همچنین مقایسه بین گروه آزمون 2 و کنترل 2 نشان داد که جنین های منجمد نشده از نظر میزان بلاستوسیست یا جنین های گروه انجمادی اختلاف معنی داری داشتند و این میزان در گروه کنترل از گروه آزمون بالا بود. دستاوردهای این تحقیق نشان داد که مرحله تک سلولی برای انجماد شیشه ای، مرحله ای بسیار حساس می باشد و انجماد، قابلیت زنده ماندن جنین ها را به میزان زیادی کاهش می دهد. اما استفاده از هم کشتی به همراه محیط های کشت متوالی می تواند اثرات مخرب ناشی از انجماد را تا حدود زیادی مرتفع سازد و این نوع کشت، سبب افزایش بلاستوسیت و کاهش دژنراسیون در مقایسه با گروه غیر هم کشتی شد، هر چند که در اثر کاربرد همزمان این دو سیستم کشت، در تکوین جنین های تک سلولی منجمد نشده، بهبود چشمگیری حاصل نشد و گروه هم کشتی با غیر هم کشتی اختلاف معنی داری نشان نداد.
کلید واژگان: انجماد شیشه ای، هم کشتی، محیط های کشت متوالی، جنین تک سلولی موشPurposeWide spread efforts have been mode to facilitate and compare cryopreservation ethods needed for the long-term conservation of embryos. Improving the embryo's culture system is another purpose of many researchers. Co-culture and sequential media systems can improve the developmental rate of vitrified and non-vitrified embryos separately. The aim of this research was to study, the effect of simultaneous use of vero cell co-culture and sequential media on the development ofone-cell mouse embryos.Materials And MethodsOne-cell mouse embryos were taken from NMRI mice with vaginal plaque, by the flushing method 26 hours after the intraperitoneal injection of hCG. Half of the embryos were vitrified by 40% ethylene ghycol solution (EFS 40%), then thawed and transferred to "R1-R2" (experiment group I) and "R1-R2 + Vera" (experiment group 2) media. The remaining embryos were transfered to the same media as the non-vitrified control group. The data was recorded within 120 hours of the cultivation period and analyzed using the Chi square and Fisher tests.Results And DiscussionThe results were as fallows: in vitrified embryos, the developmental rate in the "R1-R2 +- Vero" group was higer than the "Rj-R,' alone and the co-culture improved the developmental rate of the embryos significantly. But there was no significant difference between the developmental rate of the co-cultured and the non co-cultured embryos in the non vitrified group. Therefore, simultaneous use of co-culture system and sequential media has not any positive effect on the development of non vitrified embryos. But in vitrified embryos it improves the development of embryos. -
IntroductionThe incidence of chromosomal abnormalities was investigated in untransfered embryos reuslted from in vitro fertilization (IVF) or intracytoplasmic sperm injection (ICSI) procedures.Materials And MethodsA total of 238 embryos of varying morphology between the pronucleated stage and 8-cells were analysed. The cytogenetic method of Dyban was used for chromosome preparation. Embryos were kept in a medium containing 0.2mg/mL colchicine for 4-6 hrs.Then cells were transferred into watch glass contaning hypotonic solution of 1.93% sodium citrate and 0.56% KCl for 25-60 min. Cells were fixed in three different fixatives sequentially, then they were stained in 10% Giemsa and examined with a light microscope at /Far/*/Lat/1000.ResultsThe cytogenetic analysis of 68 embryos resulted from IVF and 70 embryos from ICSI indicate that a total of 89.86% of embryos were cytogenetically abnormal and only 10.14% were normal. In both groups, aneuploidy was found to be the most frequent observed abnormality (43.48%). In addition to that various types of aberrations such as triploidy (2.2%), haploidy (1.5%), mosaicism (29.7%) or structural abnormalities (13.04%) were found.ConclusionThere is a progressive loss of the embryos with chromosomal abnormalities during preimplantation development. The maternal age may have an effect on the chromosome segregation in oocytes causing aneuploid embryos. This study also shows that both healthy and morphologically unhealthy embryos can have either normal or abnormal chromosome complements; therefore the embryo morphology is not always indicative of chromosome status.Keywords: Chromosomal Aberrations, Preimplantation embryo, In Vitro Fertilization
-
Introductionin this study we examined the effect of ampullary and isthmic epithelial cell of golden hamster oviduct on N-Mary mouse embryo development during 4-days in vitro co - culture, and the effect of injected gonadotropins on the quality of co-culture.Materials And MethodsGolden hamster oviducts were isolated 18-24h after treating the hamster with HCG. They were flushed with DMEM / Ham’s F - 12+FCS %10. According to presence of cumulus mass, the oviducts were classified into two categories: (i) responding to gonadotropins which contained cumulus mass, and (ii) non - responding to gonadotropins, which showed cumulus mass. Using collagenase ampullary (A) and isthmic (I) epithelial cells from each category were isolated and cultured in medium. A monolayer culture system of hamster oviducts were estabilished. The late, 2- cell N-MARY mouse embryos were cultured for 4- days with T6 + FCS %10 on the monoalyers (A-I) and T6 + GCS. 10% as control group (C) in each category.Results(i) After 96h hatching blastocyst in A, I and C were 64%, 50% and 36% respectively, which, significantly higher in co-culture groups (p<0.001 for A, p<0.05 for I).In addition during first 24h, embryo development in ampullary co - culture was better than isthmic co-cultures specially in ampulla (p<0.001 for A and p<0.05 for comparison of A and I) (ii) After 96h, more embryos developed to blastocyst in C group than A and I groups, (C= %58, A= %20, I=%27,p<0.001)ConclusionHamster oviduct epithelial cells which are specialized cells from ampullary region could improve the development of embryos from other species and this is greatly affected by response of hamster to gonadotropins.Keywords: Co, culture, Embryo Development, Oviduct, Gonadotropins
- در این صفحه نام مورد نظر در اسامی نویسندگان مقالات جستجو میشود. ممکن است نتایج شامل مطالب نویسندگان هم نام و حتی در رشتههای مختلف باشد.
- همه مقالات ترجمه فارسی یا انگلیسی ندارند پس ممکن است مقالاتی باشند که نام نویسنده مورد نظر شما به صورت معادل فارسی یا انگلیسی آن درج شده باشد. در صفحه جستجوی پیشرفته میتوانید همزمان نام فارسی و انگلیسی نویسنده را درج نمایید.
- در صورتی که میخواهید جستجو را با شرایط متفاوت تکرار کنید به صفحه جستجوی پیشرفته مطالب نشریات مراجعه کنید.